yy.vip易游-余甘子果实中具有抗氧化和降糖活性成分研究

　　YYVIP易游·(中国有限公司)官方网站-其根、叶、果实和树皮皆可入药，在我国多个少数民族中常用于祛湿利尿、抗炎解热该植物富含酚酸、鞣质、黄酮、甾醇、三萜、木脂素、生物碱等多种生物活性成分。其中，酚酸类成分是余甘子果实的主要活性物质，已分离得到没食子酸、鞣花酸等多种酚酸。这些成分具有抗氧化、抗炎、降血糖、调血脂、保肝及免疫调节等多种药理活性1-(2-amino- benzofuran-3-yl)-2-(2-methoxyphenyl)ethan-1-one3,4,8,9,10-pentahydroxy-dibenzo[b,d]pyran

　　UV-2401A型紫外分光光度计（日本京都岛津公司）。Bruker DRX-600型核磁共振仪（Bruker公司）。API QSTAR-TOF型高分辨飞行时间质谱仪；Multiskan FC型多功能酶标仪。柱色谱用硅胶（200～300目，中国青岛海洋化工有限公司）、反相硅胶RP-18（40～60 μm，德国达姆施塔特默克公司）。Waters 600型高效液相色谱仪，配备Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×9.4 mm，5 μm）。预制薄层板（厚度200～250 μm，青岛海洋化工有限公司）。

　　余甘子P. emblicaL.果实样品于2023年9月采自中国云南省景谷县，由中国科学院昆明植物研究所昆明植物标本馆刘恩德博士鉴定。凭证标本（编号kib-24-09-23）存放于中国科学院昆明植物研究所植物化学与天然药物全国重点实验室。

　　余甘子鲜果（79.0 kg）用95%甲醇-水室温浸泡，提取液浓缩除去有机溶剂后，以醋酸乙酯萃取，得到醋酸乙酯萃取物1.0 kg。再经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（20∶0、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5）梯度洗脱，得到6个流分（Fr. A～F）。

　　通过所分离化合物对2,2-二苯基-1-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基的清除能力来评价分离化合物的抗氧化活性[12-13]。将待测化合物（终浓度50μmol/L）与DPPH乙醇溶液（终浓度100μmol/L）于96孔板中混合，每个浓度设置3个独立重复，同时设立不含药物的空白对照组以及Trolox（终浓度40mmol/L）作为阳性对照。在30℃条件下避光孵育1 h，使用Thermo Scientific MULTISKAN FC型酶标仪测定515 nm处的吸光度（A）值，按公式计算DPPH清除率。

　　待测样品以50μmol/L为初始浓度进行二倍梯度稀释，至最小浓度0.78μmol/L，与α-葡萄糖苷酶溶液（0.025 U/mL）、缓冲液及底物4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG，1 mmol/L）依次加入96孔板中，每组设置3个重复。同时设立不含药物的空白对照以及槲皮素（终浓度10、5mmol/L）作为阳性对照。在37℃下孵育50 min，随后使用酶标仪于405 nm波长下测定A值，按公式计算抑制率。按Reed＆Muench法计算[14]半数抑制浓度（median inhibition concentration，IC50）。

　　在50μmol/L浓度下，对化合物1～9的DPPH自由基清除能力进行了测试。如表2所示，化合物5～8表现出DPPH清除能力，清除率为86.59%～90.75%。化合物1～4、9在50μmol/L浓度下DPPH清除率均＜20%，表明其在该体系中无明显抗氧化活性。

　　结果表明，余甘子的抗氧化活性与其化学成分中的多酚结构密切相关。化合物5～8均展现出显著的DPPH自由基清除能力，其共同结构特征在于分子中含多个酚羟基，特别是化合物8（鞣花酸）和7（五羟基二苯并吡喃酮）具有的高度共轭芳环与多个酚羟基，能有效提供氢原子以中和自由基。研究结果揭示了酚羟基数量与密度是决定余甘子抗氧化活性的关键药效基团，为其传统的抗氧化功效提供了坚实的物质基础。

　　如表3所示，化合物1、7和8表现出抑制活性，IC50值为1.44～33.06μmol/L。化合物7表现出强的抑制活性，IC50值为（1.44±0.09）μmol/L，优于阳性对照[槲皮素，IC50＝（4.96±0.02）μmol/L]。化合物2～6在50μmol/L浓度下的抑制率均＜15%，表明其无明显抑制活性。

　　结果表明，α-葡萄糖苷酶抑制活性源于2类不同的化学结构：其一是多酚类化合物，如活性最强的化合物7和8，其多个酚羟基可能通过与酶活性位点形成氢键而发挥作用。更重要的是，本研究首次从该植物中鉴定出1种新型生物碱余甘子碱A（1），其氨基苯并呋喃与甲氧基苯乙酮骨架展现出优异的抑制活性，揭示了含氮杂环结构在余甘子降糖功能中的重要作用。返回搜狐，查看更多